由于細(xì)菌懸液的濃度與光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,并將所測的OD值與其對應(yīng)的培養(yǎng)時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線,此法快捷、簡便。生長曲線反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時所表現(xiàn)出的群體生長規(guī)律。依據(jù)其生長速率的不同,一般可把生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線,可了解各菌的生長規(guī)律,對于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。
比濁法的操作步驟如下:
(1)種子液制備取大腸桿菌斜面菌種1支,以無菌操作挑取1環(huán)菌苔,接人肉膏蛋白胨培養(yǎng)液中,靜止培養(yǎng)18h作種子培養(yǎng)液。
(2)標(biāo)記編號取盛有50mL無菌肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的250mL三角瓶11個,分別編號為0,1.5,3,4,6,8,10,12,14,16,20hom。
(3)接種培養(yǎng)用2mL無菌吸管分別準(zhǔn)確吸取2mL種子液加入已編號的11個三角瓶中,于37℃下振蕩培養(yǎng)。然后分別按對應(yīng)時間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養(yǎng)結(jié)束時一同測定OD值。
(4)生長量測定將未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基傾倒入比色杯中,選用600m波長分光光度計上調(diào)節(jié)零點,作為空白對照,并對不同時間培養(yǎng)液從0h起。依次進(jìn)行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定,使其OD值為0.10~0.65,經(jīng)稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數(shù),オ是培養(yǎng)液實際的OD值。
(5)結(jié)果將測定的OD值填入表中,以時間為橫坐標(biāo),ODom值為縱坐標(biāo),繪制大腸桿菌的生長曲線。目前市場上已經(jīng)有微生物比濁法測定儀銷售,這樣就可以大大減少實驗工作量,提高實驗的準(zhǔn)確性。
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